Álvarez-Blázquez1 NS。www.modernagriculturefarm.com、 ロドリゲスビジャヌエバ2、 J.L.、 ペレスリアル1 E.、 Peleteiro1、 J.B.、 Mylonas3、 C.C.、 パパダキ3、 NS。、 Papadakis3 I.、 Fakriadis3、 私。、 Robles4、 NS。、 リナレス5、 NS。

1InstitutoEspañoldeOceanografía-IEO、 CentroOceanográficodeVigo、 スペイン。

2InstitutoGalegodeFormaciónenAcuicultura-IGAFA、 Illa de Arousa、 スペイン。

3ギリシャ海洋研究センター-HCMR、 イラクリオン、 クリティ島、 ギリシャ。

4 CTAQUA、 カディス、 スペイン;実際の所属TESTINGBLUE S.L.、 カディス、 スペイン。

5 Xunta de Galicia、 CentrodeInvestigacionesMariñas、 ビラノーバデアルーサ、 スペイン。

序章

EUが資金提供するDIVERSIFYプロジェクトに含まれる魚種について発表された一連の記事に続いて（4月を参照、 5月、 六月、 International Aquafeedの7月と10月号）、 2013年から2018年の間に実行された ここでは、オオハタ（Polyprion americanus）を紹介します。 これはプロジェクトで最も挑戦的な種でした。

イシナギは最大のイシナギ科の種の1つであり、 100kgのサイズに達します。これは、ほぼ世界中で見られる深海魚（100〜1000m）であり、遠海魚の幼魚期が長いことを特徴としています（Ball et al。、 2000;セドベリー他、 1999）。それは水産養殖にとって最も興味深い新種の1つであり、 その急速な成長のために（Suquet＆LaPomélie、 2002; Rodriguez-Villanueva et al。、 2011）、 後期生殖成熟、 DIVERSIFY試験中に死亡率が記録されておらず、市場価格が高く、水揚げが制限されており、飼育下での取り扱いが容易です（Papandroulakis et al。、 2008）。サイズが大きいため、付加価値製品の処理や開発に適しています。 これはEU市場にとって興味深いものになる可能性があります。

レックフィッシュは不活性食品を簡単に受け入れますが、 非常に貪欲な肉食動物であること。飼育下に置かれた野生の個体は、10か月の間に1キログラムから5キログラムに成長しました（Rodriguez-Villanueva et al。、 2011）。難破魚の遅い生殖成熟、 これは、飼育下で5〜10歳で発生します。 種親の開発と管理にとって問題となる可能性があります。一方で、 その長い幼若期は養殖の観点から大きな利点です、 性的成熟の前に商業化を可能にし、 したがって、成熟に関連する問題を回避し、 成長の低下など。成長は性別の影響を強く受け、メスのレックフィッシュはオスよりもかなり重いことが実証されています。 他の多くの海水魚種で観察されるように（Rodríguez、 2017）。

世界の難破魚の個体数は、遺伝的に異なる3つの資源で構成されています。1）北大西洋と地中海、 2）ブラジルおよび3）南太平洋（Ball et al。、 2000）。レックフィッシュは性的二形性のない雌雄異体性の種であり、産卵は深さ300〜500mの大陸斜面で発生します。 産卵集団の形成を伴う（ペレスとクリッペル、 2003）。底魚の残骸の個体は、岩が多く泥だらけの底に生息します。 40-200mの深さで;しかし、 個体は300mより深い海域で頻繁に見られます。 記録された最大深度は1000mです（Fischer et al。、 1987）。幼魚の最初の部分（孵化から体長約60cmまで）は遠海魚であり、浮遊する残骸と一緒に生息します。

この種のためのDIVERSIFYの仕事は、生殖と遺伝学の分野に焦点を合わせてきました。 幼稚園と栄養学、 これは、これまでのレックフィッシュ養殖を妨げる主要なボトルネックでした。

生殖と遺伝学

ガリシアの3つの機関（スペイン）の施設で3つの資源が維持されています：海洋学研究所（IEO）、 ア・コルーニャのアユンタミエント、 （MC2）とConselleria do Marは、Xunta de Galicia（CMRM）から来ました。加えて、 1つの株は、クレタ島のギリシャ海洋研究センター（HCMR）で維持されていました。 ギリシャ。これらの株の繁殖の発達は2年間続いた。生殖期（卵形成、 成熟と産卵）は難破船ではかなり長かった、 10月に始まり、7月まで続きます。 特に、その年の間に低温にさらされたスペインの種親で。難破魚の最大の卵母細胞の直径は、3月から7月の間に発見されました。 これが予想される産卵期間であることを示唆しています。難破魚の卵のサイズ（直径約2mm）は、ヨーロッパの大西洋岸と地中海の温帯海域で養殖されている他のどの海水魚よりも著しく大きい（Papadaki et al。、 2018）。底魚には、卵のサイズが大きく、繁殖力が低いことが不可欠であると考えられています。 それは比較的一定の環境でのより高い個人の生存に関連しているので、 変化する環境に直面しなければならない遠海の小さな卵とは対照的に、 生存がより困難であり、したがって高い繁殖力がより有利である場合。胚の発達と初期のライフステージが説明されています（Papandroulakis et al。、 2008;ペレテイロ他、 2011）、 この種の大きな卵サイズは、その幼虫の飼育に大きな利点を提供する可能性があることを示しています。

年間を通じて16°Cの一定温度です（HCMR、 ギリシャ）、 それはおそらく、難破魚のブリーダーが野生に生息する深海でさらされる環境をよりよく表していますが、 そして、彼らは捕獲された雌の難破魚の繁殖発達に有益な効果を持っていないようでした。スペインの資源で自然に変動する温度で飼育された魚は、ギリシャで一定の温度で飼育された魚と同等またはそれ以上の繁殖成績を示しました。 つまり、それらは成熟し、自発的にスポーンしました。一方で、 男性、 HCMRストックで一定温度に維持され、 スペインで毎年のサイクリング温度にさらされた男性と比較して、モニタリング期間のほぼ全体にわたって完全な精子形成状態を維持しました。 おそらく男性は、研究の2つの異なる温度レジームに対して女性とは異なる反応を示したことを示唆しています。

自発的なスポーンは、3つのガリシアの株から得られました。 プロジェクトが進行し、より多くの経験が得られるにつれて、産卵と受精率の規則性が増しました。相対的なバッチ繁殖力も、本研究の4つの難破魚種親の間で変動しました。 2の間で変化します 000と30 000個の卵が産卵-1kg-1体重。限られた採卵は、ホルモン誘導およびタンク産卵または成熟個体の手動ストリッピング後の飼育下産卵者からも達成されています。 2018年のDIVERSIFYの最後の年の間に、 産卵は、スペインの種親におけるより良い繁殖力と受精とより一致するようになりました。得られた結果に基づいて、 種を飼育下に完全に順応させることで、一貫した自然産卵と高品質の卵の生産が可能になると期待しています。

産卵は夜間または早朝（05:00から08:00の間、 正午にいくつかの例外を除いて）。 2017年と2018年には、 IEOでの自発的な産卵、 MC2とCMRMの株は、多数の受精卵を産みました。産卵周期はすべての資源で3〜5日であり、受精の成功は50〜100％の範囲であり、各雌の産卵期の後半に向けて卵質が改善されました。雌は繁殖期ごとに最大10回産卵できることがわかっています。 同じオスが合計150日間で少なくとも30匹の産卵を受精しました。

産卵を誘発するためのゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（GnRHa）インプラントによる治療に対する雌の反応はさまざまであり、 繁殖力と卵質の点で不規則な結果をもたらします。場合によっては、タンクスポーンまたはストリップスポーンが生存不能な卵を産みました。 そして他の場合には、受精が成功したとしても、 ハッチングはゼロでした。ストリッピングによる人工産卵は、GnRHa誘導後に自発的に産卵する問題を示す成熟した雌に最適な方法である可能性があります。 （外因性ホルモンなしで）卵母細胞が自然に成熟する女性の場合、ストリッピングを使用することはお勧めできません。 操作によって引き起こされるストレスは、卵子の質を低下させ、受精の成功を欠く可能性があるためです。

男性の特徴に関しては、 性的成熟は、女性の場合と同様に3月から7月に起こります。 4月と6月にピークに達します。研究されたすべての精子の質のパラメーターは、研究の2年間で大幅に変化しました。 しかし、雌の繁殖期（3月から6月）との明確な相関関係はありません。全体、 精子の質は年間を通して高いと考えられていました。平均精子密度は4.5-11.5x109精子ml-1の範囲でした。 精子の運動性は常に60パーセントより高かった、 運動持続時間は1.5から6分の範囲であり、4°Cでの精子の生存は3から10日の範囲でした。 場合によっては18日間の生存が達成されましたが（ペレスリアル、 2019）。精子密度は他の遠海魚種と非常に似ていました、 ヨーロピアンシーバス（Dicentrarchus labrax）など、 ヨーロッパヘダイ（Sparus aurata）または貧弱な（Argyrosomus regius）。しかし、 難破魚の精子濃度は、ソール（Solea solea）およびターボット（Scophthalmus maximus）に見られる濃度よりも高くなっています。

飼育下でレックフィッシュのスポーンを取得するには、3つの可能な手順があります。

1. ブリーダーを大型タンク（> 40 m3）の自然光熱条件にさらし、自発的な産卵を得る
2. GnRHaをロードしたホルモンインプラントで産卵を誘発し、 魚が自発的に排卵や産卵を起こさない場合、 魚が水槽に産卵できるようにします
3. ホルモン療法によって成熟と排卵を誘発し、 卵をストリップスポーンした後、体外受精します。

飼育下でのこの種の取り扱いは簡単ですが、 その大きなサイズは、その幸福を保証し、ストレスによって引き起こされる生殖機能障害を回避するために大きなタンクを必要とします、 それは配偶子形成と成熟に影響を与えるでしょう。排卵のホルモン誘導後、in vitroでレックフィッシュをストリップスポーンし、卵子を受精させることは可能ですが、そのような大きな魚を扱う場合、メスの頻繁な取り扱いには問題があります。プロジェクト中、 難破魚は自発的に繁殖し、卵子の繁殖力と受精に非常に良い結果をもたらすことが示されています。 これは、この種の産業養殖生産の観点から推奨される繁殖方法です。

非常に近い種の繁殖と幼虫の飼育、 ハプク（Polyprionoxygeneios）はニュージーランドで最近達成されたばかりです（Anderson et al。、 2012; Symonds et al。、 2014;ワイリー他、 2018）。種親の不足は、難破魚の養殖にとって不利です。 しかし、この種の明確な生物学的および経済的可能性は、これまで難破魚の家畜化に関与したほぼすべてのヨーロッパのパートナーをまとめるDIVERSIFYの努力の一部の割り当てを正当化しました。 文書化されたボトルネックを克服するため、つまり、 繁殖と幼虫の飼育-商業生産を開始するために適切な数の稚魚を生産するため。

ラルビカルチャー

卵の発達の最初の段階では、 外部条件に対する脆弱性が最も高くなります。最適な孵卵温度と幼虫の培養条件は、正しい胚の発育を得るためにIEOの施設で調整されています（Álvarez-Blázquezetal。、 2016）。曝気などの動物工学的側面、 タンクの流体力学と水の流れが最適化されています。これらは、幼虫の奇形を減らすために不可欠なパラメータです。 これは、さらに調査が必要な問題です。 DIVERSIFYでの難破魚の幼稚園の試験中、 Gunakesera et al（1998）によって記述された卵黄嚢（SYSS）の消費、または一般的なマスについて記述された「青嚢病」（BSD）に関連する症候群に類似している可能性のある奇形が見つかりました。この問題を特定するには、さらなる研究が必要です。

難破船では、 消化器系の個体発生は、他の種と比較して遅い手順と見なされます。消化器系の発達は内因性の要因によって制御され、一般的に遺伝的にプログラムされています、 しかし、消化器系の構造の出現時間は、一連の外因性の要因によって影響を受ける可能性があります、 温度が最も重要なものの1つです（Kamler、 2002）。加えて、 網膜の個体発生は、ほとんどの魚種の一般的なパターンに類似していることがわかりました。ハッチングでは、 網膜は未分化で機能しない組織であり、 初期の遠海魚のほとんどの海産魚に見られるように（パンクハーストとイーガー、 1996;パンクハーストとヒルダー、 1998; Pankhurst et al。、 2002; Roo et al。、 1999;シャンド他、 1999）。錐体細胞が最初に現れた光受容体でした（6dph）。この事実は、5 dphの魚が、ワムシやアルテミアノープリウスなどの餌を識別できることを示しています。

DIVERSIFYトライアル内で、 幼虫の孵化は42から82パーセントの範囲でした、 これは非常に受け入れられると見なすことができます。しかし、 幼虫の生存はかなり限られています。プロジェクトの最後の年の間だけ、 離乳に成功した幼虫を得ることができ、IGAFA（ガリシア水産養殖研究所、 スペイン）、 これはCMRMの協力組織です。不活性食品に離乳した稚魚の生産に成功したのは、このプロジェクトで初めてでした。 そしてそれは水産養殖条件下で難破魚を生産する努力のマイルストーンです。この試験は、レックフィッシュの成長に関する重要なデータを提供し、レックフィッシュの幼生の摂食プロトコルと特定の行動および変態についての知識を増やしました（Rodríguezetal、 2019）。

プロジェクトの最後の年の間に、 幼虫の培養で多数の実験的試験が行われた。 さまざまな培養システムの調整に焦点を当てています（フロースルー、 メソコスムと再循環養殖システム、 RAS）および水温などの環境パラメータ、 培養量、 幼虫の密度、 フードシーケンス、 空気、 ライト、 タンクの形と色。

最良の結果は、IGAFA施設のRASで、IEOとMC2の産卵からの2つの幼虫のバッチで達成されました。食べ物はワムシに基づいていました、 アルテミアノープリウスと濃縮メタノープリウス。幼虫の両方のバッチは離乳期に達し、現在は幼虫期にあります。残骸の稚魚のバッチが養殖条件下で生産されたのはこれが初めてであり、この種を産業規模での搾取の確固たる候補にするための私たちの努力のマイルストーンを表しています。

DIVERSIFYプロジェクトでの難破魚の幼生養殖実験の主な結果が公開されました（PérezRialetel。、 2019）そして次のように要約することができます：

• 消化器系と視覚系に関連する器官の個体発生は、孵化後23日目まで完了しませんでした。ほとんどの臓器（19 dphで見えるようになった上顎の上顎歯を除く）、 8dphで登場
• 卵の孵卵に最適な温度は16.5〜19.5℃の範囲です。より低い温度（14±0.5ºC）は、より高い幼虫の変形と低い孵化率を促進します、 潜伏期間の最初の3日間は死亡率が高くなります。幼虫の培養温度は16〜18℃で、生存と成長を促進するのに十分です。
• 新しく孵化した幼虫は、大きな卵黄嚢が特徴です。 17±0.5ºCで20日目まで内因性の埋蔵量を保存します。大きな卵黄嚢と脂肪滴の吸収が遅いことは、長期間の独立栄養栄養を示しています
• 幼虫の給餌シーケンスは、17.5〜18℃の温度で良好な結果をもたらす再循環システムで定義されました。 7-9dphの自然な光周期で。生き餌の餌付けプロトコル：アラキドン酸（ARA）サプリメントフォーム8-19 dphで強化されたワムシ、 アルテミアノープリウスは15〜23 dph、アルテミアメタナウプリウスは18〜48dphです。不活性食品は40dph以降に投与されました
• インキュベーションと幼虫の培養技術はこの種の要件に合わせて調整され、RASでの幼虫の培養で重要な結果が達成されました（Rodríguezetal。、 2019）

栄養

レックフィッシュの栄養要件はこれまで不明であり、商業的に捕獲されたものからの摂食生息地に関連する言及はわずかしかありませんでした（Brick Peres＆Haimovi、 2003）および飼育下での給餌率（Papandroulakis et al。、 2004）。最近、野生の難破魚の組成についていくつかの研究が行われました（Roncarati et al。、 2014;リナレス他、 2015）およびそれらの形態計測特性（Álvarez-Blázquezetal。、 2015）。レックフィッシュの種親用飼料の最適な開発は、その水産養殖の将来にとって不可欠です。食餌性脂質、特に脂肪酸は、高品質の配偶子と海産魚の卵の生産を成功させる上で重要な役割を果たします（Izquierdo et al。、 2001;サージェント他、 2002）。また、 生きた獲物の濃縮製品の開発は、幼虫の養殖で成功するために非常に重要です。海水魚の幼魚の多価不飽和脂肪酸（PUFA）の要件を理解するには、DHAの最適な食事比率を定義する必要があります。 EPAとARA。

野生の難破魚の雌からの性腺の生化学的分析のデータに基づいて、 飼育された魚から得られた卵と幼虫、 いくつかの生きた飼料濃縮製品は、幼生の難破魚のために開発されました。残骸の幼生を使ったいくつかの栄養実験がDIVERSIFYで行われ、幼生が 一般に、 テストされた濃縮された生きた獲物の良好な受け入れと、テストされた濃縮製品で強化された獲物を与えられた難破魚の幼生の脂肪酸組成の違いは、生きた異なる日に見られませんでした。幼生の発達に沿った難破魚の幼生の脂肪酸プロファイルは、大量のPUFA、特にDHAを示しています。 EPAとARA。さらに、 供給された種親飼料の脂肪酸プロファイルと卵母細胞および卵子の脂肪酸プロファイルの間には明確な関係があります（Linares et al。、 2016年、 2018）

野生標本の組織の組成に関して得られた結果は、この種の栄養要求の知識を進歩させるのに非常に役立ちました。 これは、筋肉内に大量のタンパク質と低レベルの脂質を示しています。加えて、 結果は、幼虫の餌として使用される濃縮された生きた獲物がよく消化されていることを示唆しています。これまでのところ、 幼虫の生存率は非常に低く、 2018年の結果、 最初の少年の獲得で、 非常に有望です。

この種が速い成長速度と飼育環境と取り扱い手順への容易な適応を示すことは非常に明白です。産卵期（3月から7月）には低い給餌率が記録され、秋には高い給餌率が発生しました。半湿餌を与えられた魚の摂取率は0.2から0.5パーセントの間で変動しました。 乾燥ペレットを与えられたものでは1〜1.8パーセント（ペレスリアル、 2019）。 DIVERSIFYプロジェクトで得られた栄養面での成果は、以下の点にまとめることができます。

骨格筋には大量のタンパク質が含まれており（野生魚で84％、飼育魚で78％）、脂質レベルは飼育魚（25％）よりも野生魚（7％DW）の筋肉で低くなっています。筋肉の脂肪酸組成については、 PUFAと∑n-3の値は、野生の難破魚（それぞれ総脂肪酸の39％と34％）の方が飼育魚（30％と24％）よりも高くなっています。 DHA値は、養殖魚では12パーセント、野生魚では26パーセントに相当します。 EPAの含有量は、飼育された魚で見られたパーセントと野生の魚で4パーセント、ARAは飼育された魚と野生の魚でそれぞれ1.6パーセントと3.1パーセントを表しています。 EPA / ARA比は、飼育魚で4.6、野生魚で1.5の値を持っています（Linares et al、 2015）。

生物学の観点から、この種の知識は大幅に進歩しました。 栄養、 生殖と生理学、 飼育下への適応と同様に、 生殖技術と幼虫の培養およびその幼虫の個体発生に関する最初の知識が提供されました。得られた結果と自然環境における標本の不足、 この種の養殖の開発に研究努力を捧げ続けるために非常に重要な2つの側面です。産業養殖の多様化を視野に入れた有望な種と考えられています。飼育下で少年を何とか獲得したことは、水産養殖部門に大きな影響を与えました。 多様化と革新に興味があります。栽培における科学的進歩への一般的な関心は高く、 特に、現在この種の成熟した標本の在庫を保有している企業（主にスペイン）。