KarthikMasagounder博士による ヘッドアクアアンドスワインリサーチ、 Evonik Nutrition and Care GmbH、 ドイツとDアレンデイビス博士、 教授、 オーバーン大学、 米国
エビの肝膵臓から抽出された酵素に基づくinvitro研究は、エビがDL-メチオニル-DL-メチオニン（AQUAVI®Met-Met）の4つの利用可能な異性体を完全に切断できることを示しましたが、速度は異なります。これにより、消化管でのD-およびL-メチオニン（Met）の遊離と吸収の遅延が可能になります。しかし、 異なるMetソースを与えられたエビの血リンパ（脊椎動物の血液に類似した液体）におけるMetの食後プロファイルの変化を示すinvivoデータは公開されていません。
そのため、AQUAVI®Met-MetまたはDL-Metを補給したバナメイエビの血リンパ中の他のアミノ酸との関連で食後のMetレベルを調査および比較する研究を開始しました。エビの血リンパのMetレベルに対するさまざまな発生源の影響を、2つの給餌頻度（1日1回と1日3回）で評価し、給餌頻度が血リンパのMetレベルに対する食事の影響に影響を与えるかどうかを理解しました。
Metは通常、実用的なエビ飼料の最初の制限アミノ酸であるため、その補給が不可欠です。以前の研究では、AQUAVI®Met-Metは、DL-Metと比較してエビにとってより効率的なMetソース（≥200％）であることが示されていました（Xie et al.2017; Niu et al.2018）。 AQUAVI®Met-MetとDL-Metのバイオアベイラビリティの向上は、主に（i）水溶性と浸出が少ないこと、および（ii）さまざまな立体異性体（DL-Met-Met、 LD-Met-Met、 LL-Met-Met、 DD-Met-Met）。
さまざまなメチオニン源と給餌頻度をテストするための試験デザイン
基礎食は、主要なタンパク質源として大豆ミールを使用して、約37パーセントのタンパク質を含むように処方されました。 小麦と魚油を主なエネルギー源として使用すると、脂質が8％、総エネルギーが約20 MJ / kgになります。基礎食は、メットを除いて、バナメイエビの既知の栄養要件を満たすように処方されました。基礎食からの0.30パーセントのグリシンを0.30パーセントのDL-Met（DL-Met食）または0.31パーセントのAQUAVI®Met-Met（Met-Met食）に置き換えることによって、2つの試験食を処方しました。
すべての飼料は、オーバーン大学の飼料研究所で肉挽き肉と3mmダイを使用して圧力ペレット化されました。ペレット化後、 飼料は水分含有量が8〜10％になるまで乾燥し、4℃で保存しました。 3つの食事で分析されたMetおよび他のアミノ酸レベルは、計画されたものと近い値を示しました。
トライアル1では、 54タンク、 各タンクには4つのエビ（平均体重約17g）が入っており、 に使われていた。各食餌は合計18タンク（80リットル容量）に提供されました。これにより、6つの時点（0、 15、 30、 45、 各食事グループについて60分および120分）（3回の繰り返しx6つの時点x3つの食事=54タンク）。タンクは2回以上サンプリングされませんでした。エビは、血リンパのサンプリングの前に、4日間、1日1回の給餌で実験食に前処理されました。
異なるタンクへの給餌は、目標の時点で異なるタンクでサンプリングする時間を確保するために、午前8時から午前10時の間にずらされました。サンプリング日の前に、 エビを一晩絶食させ、給餌直前のゼロ分に各食餌群の3つの水槽から基礎血リンパサンプルを採取しました。残りの水槽のエビは、15分間、それぞれの実験食を過剰に与えられました。 タンクは余分な飼料を取り除くために吸い上げられました、 その後、血リンパ採取中にエビを絶食させた。
トライアル2では、 エビは、血リンパを採取する前に4日間餌に調整されました。各食餌は、タンクあたり4つのエビ（平均体重約21g）を含む15のタンク（80リットルの容量）に提供されました。異なるタンクへの最初の給餌は、目標の時点でのサンプリング日の血リンパサンプリングに対応するために、午前7時から午前9時30分までずらされました。日中の2回の食事の間に3時間の間隔が与えられました。エビの3つのタンクからの血リンパサンプルは、15分間隔ごとに60分までの3回目の食事の後に計画されました。
5日目、 一晩絶食したエビに2回給餌し、それぞれ1時間持続させた。 前日に使用したのと同じ給餌スケジュールに従います。各給餌後、 食べ残しの餌を水槽に吸い上げ、エビを2時間絶食させた。 3回目の給餌の前に、 基礎血リンパサンプルは、3つのタンクからゼロ分に採取されました。残りの水槽のエビは、15分間、それぞれの餌を過剰に与えられ、その後のサンプルで絶食されました。血リンパサンプルは15時に採取されました。 30、 45、 そして60分、 各治療群のエビの3つのタンクから毎回。
収集した血リンパサンプルを遠心分離し、デカントして遊離アミノサンプルを得た。次に、サンプルを凍結乾燥し、個々のアミノ酸含有量について分析しました。
Metの絶対量と総アミノ酸（TAA）は、各食事療法と時点で評価されました。個々のエビが消費する飼料量の変動が特定の時点でのMetレベルに及ぼす影響を排除するために、 会ったレベルは、測定されたTAAのパーセントで表されました。次に、この値を、2つの異なる給餌頻度の治療と異なる時点の間で比較しました。データを二元配置分散分析にかけ、血リンパTAA（μg/ ml）およびMetレベル（μg/ ml、 （％TAA）エビの。さらに、 両方の試験データを組み合わせて、 血リンパMet（％TAA）レベルも、食事の効果を評価するために3元配置分散分析にかけられました。 時間と給餌頻度（1回の給餌では120分の時点を除外）。
研究中、 水温は約30℃に保たれました。溶存酸素は、各水族館のエアストーンと再生ブロワーに接続された共通の航空会社を使用したサンプタンクを使用してほぼ飽和状態に維持されました。水の塩分濃度は約9pptに維持されました。
食事の影響（メチオニン源）、 摂食後の時間と血リンパの摂食頻度
エビの血リンパアミノ酸レベルに対する食事と時間の主効果と相互作用効果の両方の結果を表2に要約します。試験1では、 エビは1日1回給餌されました。 食事は血リンパのMetレベル（μg/ ml、 ％TAA）、 TAAではありません。 TAAレベルとMetレベルの両方が時間の影響を受けました。しかし、 TAAまたはMetでは、食事と時間による相互作用の影響は検出されませんでした。血リンパMetレベルは、エビを給餌したMet-Met食餌で、基礎食餌（μg/ ml）または基礎食餌とDL-Met食餌の両方（％TAA）と比較して高かった。 ％TAAで表される血リンパMetレベルは、基礎食よりもDL-Met食の方が血リンパで高いレベルを示しました。ダイエット全体で、 15で測定されたエビの血リンパ中のMetおよびTAAレベル 給餌後30分および45分は、一般的に他の時点で測定されたものよりも高かった（0、 60分と120分）。
トライアル2では、 エビは1日3回給餌されました。 エビ血リンパ中のTAAおよびMetレベルの絶対量（μg/ ml）は、食事と時間による相互作用効果を示しました（表2を参照）。しかし、 食事と時間の相互作用のため、特定の傾向は検出できませんでした。さらに、 事後のテューキーの比較では、平均の組み合わせの間に有意差は見られませんでした。食事グループ内のアミノ酸レベルのピークの経時的な変動は、個人間の飼料摂取量の違いが原因である可能性があります。エビに餌を与える頻度が高いほど、個体間の満腹度は大きく異なるようです。
血リンパのMetレベルを％TAAとして調べると、飼料摂取量の変動が食事効果に及ぼす交絡効果が部分的に修正されます。 ％TAAのMetレベルは、食事または時間による影響を示し、相互作用はありませんでした。 Metレベル（％TAA）は、Met-Met食餌を与えられたエビの方が、基礎食餌を与えられたものよりも高かった。 一方、DL-Met食餌を与えられたエビは、中程度の有意でないMetレベルを示しました。会ったレベル（％TAA）は、給餌後15分でピークに達し、その後時間とともに低下しました。絶対量で調べた場合、TAAおよびMetレベル（μg/ ml）でも同様の時間効果が観察されました。
三元配置分散分析を介して両方の試験から得られた血リンパMetデータ（％TAA）を対象にすると、食事による有意な効果が示されました。 時間、 相互作用の影響なしに給餌頻度。 Met-Met食餌を与えられたエビは、基礎食餌またはDL-Met食餌を与えられたエビよりも有意に高い血リンパMetレベルを示しました。 一方、DL-Met食餌を与えられたエビは、基礎食餌を与えられたエビよりも高いMetレベルを示しました。以前に検出されたように、 血リンパのMetレベル（％TAA）は、摂食後15分でピークに達し、0で観察されたレベルよりも有意に優れていました。 給餌後45分または60分。エビに1日3回給餌すると、1日1回給餌した場合よりも血リンパのMetレベルが高くなりました。スリーウェイANOVAを使用したデータ分析では、両方の給餌頻度で、Met-Met食餌と基礎食またはDL-Met食餌の両方で血リンパMetレベルの増加が明確に示されています。
全体、 研究結果は、DL-Met添加飼料と比較してAQUAVI®Met-Met添加飼料を給餌すると、エビの血リンパのMet（％TAA）が長期間にわたって高くなることを明確に示しています。それによって、 より高い体のタンパク質合成とより良い成長パフォーマンスをサポートすることができます。このinvivo研究は、AQUAVI®Met-MetとDL-Metの以前の研究で観察されたより高い生物学的効率の証拠を提供します。
